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選購全波長多功能酶標(biāo)儀時,一定要考慮濾光系統(tǒng)和測定波長

更新時間:2024-11-14      點擊次數(shù):1836
 濾光系統(tǒng)
 
    全波長多功能酶標(biāo)儀簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些全波長多功能酶標(biāo)儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測,本質(zhì)上還只是把濾片和光柵放在了一起,并沒有使兩者糅合而產(chǎn)生新的技術(shù)突破。
    光柵型濾光系統(tǒng)具有使用方便,可以進(jìn)行光譜掃描,靈活性等優(yōu)點。當(dāng)然,濾光片系統(tǒng)也有其顯著的優(yōu)勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進(jìn)行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統(tǒng),在化學(xué)發(fā)光檢測中光線的透過率高。
    目前,濾光片系統(tǒng)應(yīng)用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。
 全波長多功能酶標(biāo)儀
測定波長
 
    一般全波長多功能酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,*可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有大吸收,當(dāng)pH值降為L 0時,大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數(shù)變大,顯色加深,因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有大消光系數(shù),如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長,有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定,故全波長多功能酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。

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